Validation of the specificity and sensitivity of species-specific primers that provide a reliable molecular diagnostic for <Emphasis Type="Italic">Xiphinema diversicaudatum</Emphasis>, <Emphasis Type="Italic">X. index</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">X. vuittenezi</Emphasis>

Xiphinema diversicaudatum and X. index are vector nematode species of economic importance in viticulture regions as they can transmit Arabis Mosaic, Grapevine Fanleaf and Strawberry Latent Ringspot viruses to grapevine. Wang et al. (2003) designed species-specific diagnostic primers from ribosomal genes for both these vector species as well as a vector and a non-vector species X. italiae and X. vuittenezi, respectively. Our study aimed to confirm the specificity and determine the sensitivity and reliability of the primers for the two vector species, X. diversicaudatumand X. indexwhen challenged with closely related longidorid species and general nematode communities typical of vineyard soil. With one exception, no PCR product was observed when the primers were tested against six Longidorus, one Paralongidorus and one Xiphinema non-target species. Occasionally (three out of eight replicate PCR reactions) a weak PCR product was noted when primers for X. index were tested with L. elongatus. Furthermore, when challenged with a range of non-target nematode species comprising the nematode community typical of viticulture soil, no PCR product was amplified. An experimental dilution series of extracted DNA rigorously demonstrated that DNA from an equivalent single specimen of the target virus-vector species, X. diversicaudatum and/or X. index, could be detected amongst 1000 equivalent non-targetX. vuittenezi. Also, extracted DNA from an equivalent single target specimen was detected when added to DNA extracted from the overall soil nematode community. The primers were assessed further by using serial mixtures of actual nematodes rather than extracted DNA to simulate field soil. Using this method, a single target nematode could be detected amongst 200 non-target specimens. Given their specificity, sensitivity and reliability, it appears that these diagnostic primers will be of great benefit to phytosanitary/quarantine services related to the viticulture industry.     

中国美利奴多胎细毛羊及杂交后代多胎性状基因型分析

首次在国内采用了多胎性状基因型诊断法对多胎性状进行选择。试验采集中国美利奴多胎细毛羊及其与Romilly·Hills杂交后代、横交一代样品数分别为 47份、3 8份、2 6份 ,提取DNA确定多胎主效基因FecB 位点 ,酶切检测纯合基因BB、杂合基因B 和非多胎基因 。通过检测 ,三种基因型占样品数百分比分别为 :多胎细毛羊为 2 5 5 3 %、48 94%、2 5 5 3 % ,基因型与产羔符合率为 85 3 7% ;杂交一代为 0、76 3 2 %、2 3 68% ,基因型与产羔符合率为 76 19% ;横交一代为3 0 77%、5 7 69%、11 5 4%。在多胎性状的选择中 ,要坚决剔除非多胎基因个体 ,以缩短选育时间。     

鸭瘟病毒强毒株在急性人工感染成年鸭病例体内分布规律

5 6只 3月龄四川麻鸭经皮下接种鸭瘟病毒 (DPV)强毒 SC1株 ,成功建立了 DPV感染的急性病理模型 ,并应用PCR方法检测了不同时间 DPV在感染鸭体各组织器官的分布情况。结果表明 ,接种 2 h后 ,即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出 DPV DNA;12 h,可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食管、腺胃、血液、舌、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等检测到 DPV的 DNA。检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏和脑组织。本试验为阐明 DPV的致病机理和应用 PCR方法检测感染鸭体组织中的 DPV提供了重要的实验数据。     

神经生长因子及其受体TrKA在山羊脊髓发育中的表达特点

运用免疫组织化学超敏 SP法对山羊胎儿脊髓发育中神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)及其高亲和力受体 Tr KA的表达及其功能进行了系统的研究和探讨。结果显示 ,山羊胎儿脊髓灰质中存在 NGF及其受体 Tr KA,于 6周龄胚就可检测到 ,随胚龄增加 ,其表达范围及免疫反应着色程度逐渐增强。 NGF主要分布于腹角和背角的神经细胞 ,反应产物主要定位于胞质和突起 ;Tr KA的分布主要以腹角及胶状质为主 ,反应产物主要定位于胞核 ,后期胞质及突起也可见到阳性反应。在山羊胎儿脊髓白质中也可观察到 NGF及 Tr KA免疫阳性反应 ,其发育后期更为显著 ,阳性反应主要分布于神经胶质细胞核、神经纤维的轴索及雪旺氏细胞。结果提示 ,NGF不仅对交感和感觉神经元的发育起作用 ,而且还与腹角运动神经元的发育有关     

二丁酰环腺苷酸的合成与性质研究

以ATP为原料采用化学方法合成了dbcAMP及其钠盐 ,并对其理化性质和吸收特性进行了研究。经质谱分析 ,其结构为C18H2 3 N5O8PNa ,分子量为 4 90 .0 ;经紫外光谱测定其含量为 96 .0 % ,产品的得率为 85 .6 %。dbcAMP钠盐为白色粉末 ,可溶于水与乙醇 ,对热和酸碱比较稳定。经饲料添加和皮下注射dbcAMP检测其经消化道和皮下吸收的性能。通过测定饲喂和皮下注射dbcAMP后 0 .5h、1～ 96h不同时间内血液dbcAMP的浓度表明 ,饲料添加在 3h内达到最大浓度 84 .75pmol/mL ,皮下注射在 2h内达到最大浓度 92 .96pmol/mL ,之后血液中dbcAMP的浓度逐渐下降 ,在 96h达到较低水平。     

二丁酰环腺苷酸对猪胴体组成和肉品质的影响

通过皮下注射和饲料添加不同剂量dbcAMP进行饲养试验 ,研究其对肥育猪胴体组成和肉品质的影响。结果表明 :皮下注射 1.0mg/kg和饲料添加 2 0mg/kg对改善肥育猪的胴体组成和肉品质效果最好 ,眼肌面积分别提高31.99%和 36 .39% (P <0 .0 5 ) ;瘦肉率分别提高 12 .4 2 %和 11.94 % (P <0 .0 5 ) ;背膘厚分别降低 19.95 %和 2 0 .97%(P <0 .0 5 )。肌肉粗蛋白含量分别提高 10 .87%和 16 .5 4 % (P <0 .0 5 )。     

四川省外种猪雌激素受体基因对繁殖和生长性状的影响

本试验以四川省外种母猪的 3个品种 (大约克、长白、杜洛克 )为研究对象 ,采用PCR RFLPs的方法检测其ESR基因的PvuⅡ多态性 ,分析了该基因与产仔数及生长性状之间的关系。结果表明 :初产胎次中 ,ESR基因型间总产仔数 (TNB)和产活仔数 (NBA)差异极显著 (P <0 .0 1) ,BB和AA纯合子间TNB和NBA分别相差 5 .97和 3.72头 ,基因加性效应分别为每个B基因 2 .98和 1.86头 ;对于经产胎次 ,总产仔数 (TNB)在AA、AB基因型与BB基因型的差异达到 0 .0 1的极显著水平 ,产活仔数 (NBA)在AA基因型与BB基因型间显著差异 (P <0 .0 5 ) ,TNB和NBA母猪每窝BB纯合子比AA纯合子分别多 3.6 8和 2 .89头 ,基因的加性效应为每个B基因分别为 1.84和 1.4 4头。头胎和经产胎次中ESR基因型在初生窝重、2 0日龄头数和窝重、30 / 4 5日龄头数和窝重以及 70日龄窝重之间的差异普遍不显著 (P >0 .0 5 ) ,但是以上 6个性状在ESR基因的 3种基因型间存在BB >AB >AA的趋势     

生长肥育猪骨骼肌注射表达pGRF基因质粒的效应研究

将猪的GRF基因表达质粒注射于猪的骨骼肌后,研究其促生长效应与机理。选用始重6.3kg的44头去势长白×太湖仔猪,分6组,采用2×3因子安排的完全随机区组设计,按6～10kg、10～20kg、20～50kg、50～100kg4个阶段饲养。4个饲养阶段的饲粮低蛋白水平分别是20.70%,17.90%,15.03%,13.00%;高蛋白水平分别是23.70%,20.90%,18.02%,16.00%。pGRF基因质粒注射剂量设0mg、0.5mg、1.0mg3个水平,于试验开始与试验猪体重达60kg时共注射基因质粒2次。测定各阶段日增重,饲料消耗量,耗料增重比以及30、70、100kg时血液中GH、GRF、IGF-I的浓度。100kg时屠宰进行胴体品质测定。结果表明:饲粮蛋白水平对各阶段及全期试验猪日增重均有显著影响(P<0.05或P<0.01),对50～100kg阶段与全期日采食量和耗料增重比有显著影响(P<0.05或P<0.01)。注射pGRF基因质粒对各阶段及全期日增重均有显著影响(P<0.05),对6～10kg、10～20kg、50～100kg3阶段及全期日采食量有显著影响(P<0.05),对6～10kg阶段、50～100kg阶段及全期耗料增重比有显著影响(P<0.05)。注射pGRF基因质粒对30kg及70kg体重时猪血液中GRF、GH、IGF-I浓度均有显著影响(P<0.05)。提高饲粮蛋白水平与注射pGRF基因质粒均可明显降低超声波测膘厚及屠宰测膘厚、增大眼肌面积(P<0.05)。     

猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素的研究

从五指山猪(WSZP)近交系第8～13代培育群中，先后选用21头5～10月龄青年母猪，分别于授精后25～30d采集胎儿106个，进行原始生殖嵴(PGCs)细胞分离、培养等建系技术研究。以DMEM F10(1:1)为基础培养液，按添加或不添加生长因子，将培养液分为A、B、C3种，并以STO细胞作饲养层，在38℃、5.0％CO2和湿润的气相中进行培养建系。结果获得胚胎生殖嵴细胞(EG)细胞系6个细胞株，其中1个EG细胞株传至11代、2个传至5代、1个传至4代、2个传至3代冻存。并进行了AKP染色、体外分化、冷冻-解冻复苏和嵌合体制作等鉴定研究。研究发现：不同胚龄对EG细胞建系具有一定影响，不同培养液对EG细胞建系效果不同，STO细胞饲养层的质量是建株、传代、冷冻-解冻复苏的关键因素之一。EG细胞系的初步建立，为今后筛选进入种系的EG细胞系、实施体外基因操作提供了可能。     

江河源区披碱草和星星草混播草地土壤物理性状对牦牛放牧强度的响应

在江河源区披碱草Elymus natans 星星草Puccinellia tenuflora混播人工草地上研究了牦牛放牧强度对土壤物理性状的影响,2年的试验结果表明:随着放牧强度的增加,不同土壤层含水量均呈降低趋势,土壤容重、土壤坚实度呈增大趋势.相关分析表明, 放牧强度与不同土壤层含水量呈极显著的负相关(P＜0.01), 与土壤容重和坚实度呈极显著的正相关(P＜0.01),而且土壤容重和坚实度均具有累积效应.